Главная страница  |  Описание сайта  |  Контакты
Патент на изобретение №2468078

(19)

RU

(11)

2468078

(13)

C1

(51) МПК C12N1/20 (2006.01)

A61K39/085 (2006.01)

C12P21/00 (2006.01)

A61P31/04 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Статус: по данным на 16.11.2012 - нет данных Пошлина:

(21), (22) Заявка: 2011125886/10, 23.06.2011

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

23.06.2011

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 23.06.2011

(45) Опубликовано: 27.11.2012

(56) Список документов, цитированных в отчете о

поиске: RU 2377016 C1, 27.12.2009. RU 2377014 C1, 27.12.2009. RU 2229893 C2, 10.06.2004. CN 101057919 A, 24.10.2007. RU 2002135777 A, 27.10.2004.

Адрес для переписки:

305021, г.Курск, ул. К. Маркса, 70, КГСХА

(72) Автор(ы):

Евглевский Анатолий Алексеевич (RU),

Евглевский Дмитрий Анатольевич (RU),

Худяков Сергей Иванович (RU),

Поздеев Александр Владимирович (RU),

Тагирмирзоев Багир Маилович (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (RU),

Государственное научное учреждение Курский научно-исследовательский институт агропромышленного производства (RU)

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ

(57) Реферат:

Изобретение относится к получению и применению стафилококковой анатоксин-вакцины для профилактики и лечения болезней животных стафилококковой этиологии. Способ по изобретению предусматривает выращивание стафилококков на синтетической питательной среде с последующим автоклавированием полученной суспензии микроорганизмов. Далее осуществляют детоксикацию полученного комплекса стафилококковых экзо-, эндо и суперэнтеротоксинов двумя детоксикаторами: вначале 0,2-0,3% раствором глутарового альдегида в течение 3-5 суток при 40-42°С, а затем 0,2% раствором этония или 0,15-0,25% раствором алкилдиметилбензиламмония в течение 3-5 суток при 40-42°С. Далее целевой продукт сорбируют на гидроксиде алюминия из расчета 3-5 мг/мл. Использование способа позволяет повысить протективную и лечебную эффективность и безвредность анатоксин-вакцины. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относиться к микробиологии и биотехнологии, в частности к получению и применению стафилококковой анатоксин-вакцины для профилактики и лечения болезней животных стафилококковой этиологии.

Известные способы получения инактивированных вирусных, бактерийных вакцин и анатоксинов основаны на детоксикации, полимеризации, инактивации вирусов, бактерий и токсинов 0,8±0,2% раствором формалина (Воробьев А.А., Васильев Н.Н., Кравченко А.Т. Анатоксины. Из-во Медицина, 1965. - 488 с. Шапиро Я.С. «Микроорганизмы - вирусы, бактерии, грибы». Изд-во «ЭЛБИ». - С.Петербург, 2003 г. - С.156-160).

В следующем установлено, что формальдегид не обеспечивает полную детоксикацию и полимеризацию многих токсинов, в т.ч. стафилококковых суперэнтеротоксинов, и соответственно не превращает их в анатоксины, а также уступает по бактерицидному и вирусоцидному действию глутаровому альдегиду. Из - за канцерогенности формальдегид при изготовлении вакцин во многих странах запрещен (Медуницин Н.В. Материалы экспертного комитета ВОЗ. Биопрепараты 1, 2001. - С.21-22).

Поиск более эффективных и безвредных детоксикаторов с использованием перекиси водорода, фотоокисления, нингидрида, тирозина, В-пропилактона и т.д., носил случайный характер и не получил практического воплощения.

В то же время в Японии изготовление столбнячного, стрептококкового и стафилококкового анатоксинов проводится с использованием детоксикаторов - глюкуроновой кислоты, глюконата и глюкороната натрия (Патент 23345 с приоритетом от 06.12.1961 г.).

За прототип взят «Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины», включающий выращивание стафилококков на синтетической среде, стерилизацию и детоксикацию экзо-, эндо и суперэнтеротоксинов двумя детоксикаторами 0,2% раствором формальдегида в течение 7-9 суток при 40-45°С, а затем 0,6±0,1% раствором этония в том же режиме с последующей сорбцией на гидроксиде алюминия 1-3 мг/мл (Евглевский А.А., Евглевский Д.А., Майстренко Л.А. Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины. Патент 2377014 от 29 апреля 2008 г.).

Недостатком указанного способа является проведение детоксикации и полимеризации комплекса стафилококковых токсинов растворами формальдегида и этония.

Сравнительная оценка существующих способов получения анатоксинов и инактивированных анатоксин-вакцин и изыскание новых средств детоксикации и полимеризации выявил эффективность глутарового альдегида отдельно и в сочетании с бесчетвертичными аммонийными соединениями, в частности этония, биопага - Д, алкил диметил бензил аммония и т.д., которые были взяты за основу получения стафилококковой анатоксин-вакцины.

Технической задачей изобретения является повышение протективной и лечебной эффективности и безвредности анатоксин-вакцины путем детоксикации и полимеризации стафилококковых экзо-, эндо и суперэнтеротоксинов двумя детоксикаторами и полимеризации вначале 0,3-0,5% раствором глутарового альдегида в течение 3-5 суток при 40-42°С, а затем бесчетвертичными аммонийными соединениями - 0,2% раствором этония или 0,2% раствором алкилдиметилбензиламмония.

Поставленная задача решается заменой канцерогенного и недостаточно эффективного в отношении стафилококковых суперэнтеротоксинов формальдегида на безвредный глутаровый альдегид в 0,2-0,3% концентрации с последующей детоксикацией и полимеризацией 0,2% раствором этония или 0,2% раствором алкилдиметилбензиламмония для детоксикации комплекса стафилококковых токсинов, сорбцией на гидроксиде алюминия из расчета 3-5 мг/мл.

При этом учитывали, что глутаровый альдегид обладает более эффективными бактерицидными и вирусоцидными свойствами и детоксицирующим и полимеризирующей активностью и безвредностью по сравнению с формальдегидом, а целесообразность использования этония обоснована в обеспечении полной детоксикации стафилококковых токсинов и доказана многолетним применением его в виде 0,5-1,0% растворов, мазей и пр. в гуманной медицине, в офтальмологии, стоматологии, дерматологии и т.д.

Применение 0,2-0,3 5 растворов глутарового альдегида с 0,2% раствором этония или алкилдиметилбензиламмония в предложенном способе позволяет достичь полной и необратимой детоксикации и полимеризации стафилококковых экзо-, эндо и суперэтеротоксинов, повысить протективную и лечебную эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявленному, с использованием глутарового альдегида, этония и алкилдиметилбензиламмония, что позволяет сделать вывод в соответствии предложения условию патентоспособности - «новизна».

Сочетание средств и режимов детоксикации и полимеризации в определенной последовательности позволяет достичь эффекта, т.е. заявленное техническое решение удовлетворяет условию патентоспособности - «изобретательский уровень». При этом обеспечивается полная детоксикация и полимеризация стафилококковых токсинов, а обратное превращение анатоксина в токсин исключено.

Предлагаемая анатоксин-вакцина проявляет повышенную эффективность по сравнению с ранее существующими для профилактики стафилококкоза птиц, плотоядных, лечения маститов, пневмонии, ускоренного заживления ран и иммуностимуляции, поэтому заявленное предложение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины.

Выращенные стафилококки с экзо-, эндо и суперэнтеротоксинами в жидкой синтетической среде в 2-литровых биобутылях с объемом среды, равной 1 литру, в течение 12±3,0 суток до 10-12 млрд/мл суспензии микроорганизмов подвергают автоклавированию при 1,0 в течение 30 минут с последующим проведением детоксикации и полимеризации комплекса токсинов первоначально 0,2% раствором глутарового альдегида при 40-42°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2% раствором этония (1,2 этилен - бис - диметил карбдецилоксиметил аммония дихлорид - бесчетвертичное аммониевое соединение) в течение 3-5 суток при 40-42°С и сорбцией на гидроксиде алюминия из расчета 3-5 мг/мл. Полученную анатоксин-вакцину расфасовывают в 20, 100 и 200 мл флаконы и этикетируют.

Пример 2. Определение безвредности стафилококковой анатоксин-вакцины (CAB)

Для определения токсичности стафилококковой анатоксин-вакцины использовали белых мышей, беспородных собак, телят, поросят и 20-30 дневных цыплят-бройлеров.

Подкожное введение белым мышам (9 гол.) и цыплятам-бройлерам (27 гол.) CAB в объеме 0,5-1,0 мл в течение 5 суток не вызвало гибели животных и образование некротических и воспалительных поражений при наблюдении в течение 12 суток.

Не отмечено воспалительных и гнойно-некротических поражений и падежа животных, у 17 телят, 23 поросят и 11 собак после подкожного введения по 5-7 мл CAB ежедневно в течение 7 суток.

3. Сравнительная эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины (CAB) при лечении коров, больных маститом представлена в таблице 1.

Из данных, представленных в таблице 1 следует, что CAB при лечении коров, больных катаральным и гнойно-катаральным маститом превосходит по эффективности мастисан-А и формоланатоксин-вакцину. При том следует учитывать, что мастисан-А содержит антибиотики, которые выделяются с молоком в течение нескольких дней и особенно при кожном или внутримышечным применении. В то же время при применении CAB, после детоксикации и полимеризации 0,2% глутарового альдегида и этония, молоко используют без ограничения.

Следует отметить эффективность CAB при лечении свиней и собак с химическими ожогами кожи, бронхопневмонии телят и поросят и стафилококкоза птиц путем аэрозольного распыления в птичнике.

Таблица 1

п/п

Кол-во животных

Название препарата «Способ лечения»

Сроки лечения (суток)

Кол-во выздоровевших

1.

16

CAB в молочный сосок по 4-5 мл

5-6

13 голов

7-9

3 головы

2.

16

Мастисан А ежедневно по 12-15 мл

9-10

12 голов

11-12

4 головы

3.

16

Формол анатоксин-вакцина

7-9

14 голов

10-11

2 головы

Формула изобретения

Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины, включающий выращивание стафилококков на синтетической питательной среде, автоклавирование суспензий микроорганизмов и детоксикацию, отличающийся тем, что детоксикацию комплекса стафилококковых токсинов проводят вначале 0,2-0,3% раствором глутарового альдегида в течение 3-5 суток при 40-42°С, а затем 0,2% раствором этония в течение 3-5 суток при 40-42°С или 0,2±0,05% раствором алкилдиметилбензиламмония при 40-42°С в течение 3-5 суток и сорбцией на гидроксиде алюминия из расчета 3-5 мг/мл.